قياس أنزيمات الكبد(GOT , GPT) بطريقة الكينتك (kinetic)

كلنا بنشتغل انزيمات الكبد ال GOT , GPT بالطريقه الكينتك (kinetic)
و طبعا احنا فاهمين ان فى الطريقه الكينتك بنقيس التغيير الحادث لتركيز ماده من مواد التفاعل سواء كان هذا التغير بتزايد كميتها (increasing absorbance) اذا كانت الماده تتكون نتيجه للتفاعل او كان هذا التغيير بتناقص كميتها

 (decreasing absorbance) اذا كانت الماده تستهلك نتيجه للتفاعل

هنا فى حاله انزيمى الكبد احنا بنقيس التناقص الحادث فى تركيز ماده ال (NADH) 

و اللى بدوره بيعبر عن مدى نشاط انزيمي الكبد
ملحوظه : فى الانزيمين بنقيس فعليا نفس ماده ال NADH لكن لاحظ ان ال substrate لكل انزيم مختلف

و اللى بيحصل بالظبط داخل جهاز الكيمياء لما تدخله التيست (العينه + الرئيجنت) و طبقا للبرمجه اللى تمت للبرنامج فالجهاز ينتظر دقيقه كامله (تسمى ال lag time) ياخد بعدها اول قراءه (ِA1) ثم يأخذ قراءه اخري كل دقيقه لمده ثلاث دقائق (time interval) فيبقي عندى (A2,A3,A4)

ثم يقوم الجهاز بحساب ال (deltaA/min) delta absorbance بطرح القراءه الثانيه من الاولى و الثالثه من الثانيه و الرابعه من الثالثه فنحصل على ثلاث قيم يؤخذ متوسطهم (average deltaA/min )
ثم يقوم الجهاز بضرب الرقم الناتج فى (factor) ثم ادخاله للجهاز وقت اعداد برنامج ال GOT , GPT

اللى اشتغل على اكثر من كيت للانزيمات يعرف ان فى اكثر من فاكتور يتم اختيار واحد منهم لبرمجه الجهاز اعتمادا على كميه المتفاعلات و درجه حراره التفاعل و الطول الموجى الذي يتم عنده القياس

 (فى الصوره بامفلت شركه هيومان GPT للتوضيح) 

ملحوظه: الاطوال الموجيه المستخدمه فى القياس فى كيت انزيمات الكبد تقع فى نطاق ال (UV)

 و لذلك ستلاحظ ان المتفاعلات فى انبوبه التفاعل لا لون لها 

(حيث ان ال NADH تمتص فى نطاق ال UV الغير مرئي)

السؤال دلوقتى ازاى تم حساب الفاكتور الموجود فى بامفلت الشركه؟؟

 انت كأخصائى تحاليل مش كفايه انك تطلع الفاكتور من البامفلت و تبرمج الجهاز 

انما انت لازم تبقي عارف المبدء العلمى اللى اتعمل بيه التفاعل نفسه و الفاكتور ازاى اتحسب

 الفاكتور ده جاء من المعادله الاتيه:-
(TV x 1000) / (E-NADH X SV X b)
ال (TV) دى اختصار ال total volume و يقصد بيه الحجم الكلى للمتفاعلات (حجم العينه + حجم الرئيجنت) بالملي
ال (1000) دى عشان نتيجتنا فى الاخر تطلع بوحده ال (U/L) بدل ما تطلع (U/mL)
ال (E-NADH) الناس اللى درست تحليل الي هتفهم معنى كلمه ال molar absorptivity و دى معناها مقدره مول من ماده ما على امتصاص الضوء و دى خاصيه فزيائيه فى كل ماده تختلف باختلاف تركيب كل ماده كما انها حتى فى الماده الواحده تختلف باختلاف درجه حراره التفاعل و الطول الموجى الساقط على الماده 

و هنا احنا بنتكلم عن ال molar absorptivity الخاص بماده ال NADH لانها زى 

ما اتفقنا الماده اللى هتتقاس فى التفاعل بتاعنا
ال (SV) دى اختصار ال sample volume اى حجم العينه المستخدم فى التفاعل بالملي
ال (b) دى المسافه اللى هيعدى فيها الضوء على العينه 

(بمعنى اخر دى عمق ال flow cell او الكوفته) و هو 1 سم دائما فى كل الاجهزه

طيب تعالي نقول اننا هنشتغل تفاعل ال GPT كالاتى
*هنشتغل ب 1 مل من الرئيجنت
*عليه 100 ميكرو من العينه
*هنشتغل عند درجه حراره 37
*باستخدام طول موجى 340
طيب تعرف ان ال molar absorptivity الخاصه بال NADH فى درجه حراره 37 و باستخدام طول موجى 340 

هى تقريبا (6.3 ) و طبعا القيمه دى جايه من الابحاث اللى اجريت على الماده
طيب تعالي نطبق فى المعادله
(1.1*1000)/(6.3*0.1*1) = 1100 / 0.63 = 1746.03
اذن ده الفاكتور المكتوب فى البامفلت اللى هستخدمه فى الظروف دى
طيب ليه فى اكثر من فاكتور فى البامفلت
ببساطه لان كل فاكتور من المكتوبين يستخدم فى ظروف محدده من درجه حراره التفاعل و من الطول الموجى المستخدم (و طبعا طالما القيم دى اختلفت فبالتالي قيمه ال molar absorptivity الخاصه بال NADH ستختلف من ظروف لاخري و بالتالي سيختلف الفاكتور)

طيب تعالى نشوف حاجه من الاخطاء اللى بتحصل فى بعض المعامل
انه لما تطلع نتيجه الانزيم عاليه المفروض هيخفف العينه
___________________________________________________________
طيب بدل ما يخفف بالطريقه العلميه المعروفه

 (مثلا لو هنخفف 1:1 هنستخدم حجم من محلول الملح الى حجم من العينه و ليكن 100 ميكرو الى 100 ميكرو) 

و ناخد منهم 100 على 1 مل رئيجنت و نعيد الشغل و نضرب الناتج النهائي فى 2

الغلطه بقى بتيجى من الاستسهال و بدل ما يعمل كده يعمل الاتي ....... يشتغل بالتنصيص
يعنى ياخد 50 ميكرو على 1 مل من الريئجنت و يدخل على الجهاز و الناتج يضربه فى 2

الشكل العام بيقول ان ده صح ما انا استخدمت نص كميه السيرم كأنى خففت ؟؟

 طبعا ده غلط لان لو اخدت بالك انا قولت ان رقم الفاكتور بتاعنا بيعتمد على كميه المتفاعلات
و هنا انت غيرتها باستخدامك 50 ميكرو على 1 مل
يعنى لو جيت تحسب الفاكتور كده بالاحجام الجديده فى نفس ظروف الحراره و الطول الموجى
يطلع كده
(1.05*1000)/(6.3*0.05*1) = 1050 / 0.315 = 3333.33
و ده الفاكتور اللى المفروض تستخدمه فى الظروف دى من المتفاعلات
و طبعا انت مغيرتش الفاكتور على جهازك و ما زال الجهاز بيضرب فى الفاكتور 1746
اذن انت حصلت على نتيجه غير دقيقه
و للاسف انت مش حتلاحظ ده لان الجهاز كده كده حيديك رقم و ممكن يبقي الكيرف كويس و تضرب فى 2 و تطلع النتيجه عادى
لكن علميا انت كده اشتغلت غلط
و لازم تلتزم بالاحجام المحدده للمتفاعلات و المذكوره فى البامفلت
و لازم تستخدم الطريقه التقليديه فى التخفيف (simple dilution)
د/ خالد مجدى
د/على العربى 
----------------------

يمكنك قرأءة هذا الموضوع للتعرف أكثر

تحليل أنزيمات الكبد | GPT,GOT Test

الكلمات الافتتاحية 

فحصgpt

فحص gpt و got

اختصار gpt

تحليل got

gpt تحليل

فحص الكبد gpt

بامفلت got human

الفرق بين kinetic and colorimetric

gpt human pamphlet
الفرق بين gpt و got

طريقة عمل تحليل gpt

بامفلت gpt human